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重庆时时彩最新网址:ONPG肉汤的原理和使用说明

许英俊
录入时间:2018-6-12 9:32:34 来源:青岛海博生物

重庆时时彩客户 www.q9r8i.cn   一、培养基用途和原理:

  ONPG培养基用于各类革兰氏阴性杆菌β-半乳糖苷酶的产生能力。也可用于鉴别迟缓发酵乳糖细菌与乳糖阴性细菌,还可将ONPG阳性的葱头假单胞菌(Pseudomonas copacia)及嗜麦芽假单胞菌(Pseudomonas maltophila )与其它假单胞菌区分开。阳性菌可使培养基变黄,故不宜用于检测黄色细菌。

  该培养基的原理为,细菌分解乳糖依靠两种酶的作用,一种是β-半乳糖苷酶渗透酶(βeta-galactosidase permease),它位于细胞膜上,可送乳糖分子渗入细胞。另一种为β-半乳糖苷酶(βeta-galactosidase),也称乳糖酶(Lactase),位于细胞内,能使乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。

  具有上述两种酶的细菌,能在24-48h发酵乳糖,而缺乏此两种酶的细菌,不能分解乳糖,乳糖迟缓发酵菌只有β-D-半乳糖苷酶(胞内酶)而缺乏β-半乳糖苷酶渗透酶,因而乳糖进入细菌细胞很慢,须经培养基中1%乳糖较长时间的诱导,产生相当数量的渗透酶后,才能较快分解乳糖,故呈现迟缓发酵现象。

  ONPG可迅速进入细菌细胞,被半乳糖苷酶水解,释放出黄色的邻位硝基苯酚(O-nitrophenol,ONP),故由培养液变黄可迅速测知β-半乳糖苷酶的存在,从而确定该菌为乳糖迟缓发酵菌。

  二、试验结果判断:

  接种微量新鲜培养物,35℃培养13小时,观察结果。培养液变黄则为阳性,如为阴性,继续观察至24h。

  三、质控菌株:

  阳性菌株:大肠埃希氏菌

  阴性菌株:普通变形杆菌

  四、使用说明:

  (1)ONPG的优点为水解作用快。在有较多乳糖苷酶存在的情况下,可在数分钟内被水解而变黄。将较大量细菌培养物接种于小量ONPG培养基中,??稍冢毙∈蹦诨竦醚粜越峁?。

  (2)葡萄糖对β-半乳糖苷酶有一定的抑制作用,故应避免使用。

  (3)使用生长于含乳糖培养基的细菌进行接种,如三糖铁琼脂斜面上的培养物,可能加速试验反应。

  (4)日本坂崎介绍,β-半乳糖苷酶和ONPG试验反应不一定具有相关性。Leminor氏等用肠道菌研究了两者的相关性,他讲ONPG试验阳性菌分为两群。ONPG+β-gal+群细菌的ONPG试验在4小时内为强阳性,但ONPG+β-gal-群细菌的ONPG试验较弱,而且缓慢变为阳性。


 

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